Estado funcional dos linfócitos T CD4+ e CD8+ e seu papel na progressão lenta da infecção por HIV em pacientes pediátricos / Functional state of CD4+ and CD8+ T lymphocytes and their role in the slow progression of HIV infection in pediatric patients

OBJETIVO: Avaliar o estado funcional dos linfócitos T CD4+ e CD8+ de pacientes pediátricos venezuelanos infectados pelo HIV-1. MÉTODOS: As crianças foram agrupadas como progressoras rápidas (PRs) ou progressoras lentas (PLs), com base no quadro clínico. Para determinar a funcionalidade dos linfócitos T CD4+ e CD8+, foram utilizadas técnicas de citometria de fluxo e caracterizados parâmetros de funcionalidade dessas células por meio de testes ex vivo como expressão de CD95/Fas e de CD127 e frequência de apoptose. Além disso, determinamos, em células mononucleares de sangue periférico, a proliferação do HIV e a produção de interleucina-10 (IL-10), do fator de necrose tumoral alfa (TNF-α) e de interferon gama (IFN-γ), e também estimamos o IFN-γ intracelular em células T CD4+. RESULTADOS: Nossos resultados indicam que vários mecanismos moleculares e celulares dos linfócitos T CD4+ e CD8+ tiveram piora nos PRs em comparação com PLs e controles. Ambos os tipos de linfócitos T dos PRs apresentaram aumento na expressão de CD95/Fas (p < 0,01), redução na expressão de CD127 (p < 0,01) e elevação na frequência de apoptose (p < 0,01). Além disso, as células T desses pacientes apresentaram diminuição na capacidade de proliferação mitogênica (p < 0,05), redução na porcentagem de linfócitos T CD4+ produtores de IFN-γ (p < 0,05) e menor capacidade de produção de IL-10, TNF-α e IFN-γ (p < 0,01) em comparação com PLs e controles. CONCLUSÃO: Nossos resultados indicam que o declínio das respostas moleculares e celulares dos linfócitos T está relacionado a uma rápida progressão e à diminuição na resistência à infecção pelo HIV-1 em crianças.

OBJECTIVE: To evaluate simultaneously the functional state of CD4+ and CD8+ T lymphocytes from Venezuelan HIV-1-infected pediatric patients. METHODS: Children were assigned to subgroups of rapid progressors (RPs) and slow progressors (SPs), based on clinical features. To determine the degree of CD4+ and CD8+ T-lymphocyte functionality, flow cytometry techniques were used, and diverse parameters of the functionality of these cells were characterized by ex vivo tests, such as expression of CD95/Fas and CD127, and frequency of apoptosis. In addition, we determined, in cultured peripheral blood mononuclear cells, HIV-specific proliferation and the production of interleukin-10 (IL-10), tumor necrosis factor alpha (TNF-α) and interferon gamma (IFN-γ), besides measuring intracellular IFN-γ in CD4+ T cells. RESULTS: Our results indicate that several molecular and cellular mechanisms of CD4+ and CD8+ T lymphocytes are deteriorated in RPs in comparison with SPs and controls. Indeed, both types of T lymphocytes from RPs exhibited an increased expression of CD95/Fas (p < 0.01), a significantly reduced expression of CD127 (p < 0.01), and an augmented frequency of apoptosis (p < 0.01). Furthermore, T cells from these patients displayed a diminished capacity of mitogen proliferation (p < 0.05), a reduced percentage of IFN-γ producing CD4+ T lymphocytes (p < 0.05) and a smaller capacity of IL-10, TNF-α and IFN-γ production (p < 0.01) in comparison with SP and control patients. CONCLUSION: Our findings indicate that the decline of the normal T lymphocyte molecular and cellular responses is related to a rapid progression and a decreased resistance to HIV-1 infection in children.

Establishment and characterization of an atypical cell line from a patient with Wiskott-Aldrich-Syndrome and bone marrow allografting

Se aislaron blastos atípicos de la sangre periférica de un niño con síndrome de Wiskott-Aldrich y autotransplante de médula ósea. Las células fueron inmunotipificadas como monoblastos y crecieron en cultivo tisular en doble tiempo de 3 a 4 días. Las células aisladas originalmente y los cultivos iniciales, contenían antígenos tanto del virus herpes humano-6 (HHV-6) como del virus herpes humano-7 (HHV-7) y ácido desoxirribonucleico (ADN). Lo que disminuyó con la desdiferenciación celular en los cultivos subsecuentes. Los sobrenadantes de los cultivos celulares contenían cantidades moderadas de interleucina-6 (IL-6) y marcados niveles de factor estimulante de colonias-granulocito-monocítico (GM-CSF). Se discutió el caso desde el punto de vista de una posible co-patogénesis viral

Effect of endothelial cells on the lymphoproliferative response in Takayasu's arteritis.

Takayasu's arteritis, also known as 'non-specific aortoarteritis' is an inflammatory disease of the aorta and its major branches. It also involves the pulmonary artery. The aetiology of the disease is not known so far. Abnormalities of the endothelial cells in terms of their structure and function are seen in the pathology of a number of diseases affecting the blood vessel wall. However, involvement of the endothelial cells in non-specific aortoarteritis is not known. In an effort to identify the role of endothelial cells in the pathogenesis of Takayasu's arteritis, peripheral blood lymphocytes isolated from the blood of patients suffering from Takayasu's arteritis were cultured in the presence of endothelial cells alone and in the presence of mitogens concanavalin-A and phytohaemagglutinin-P. The peripheral blood lymphocytes of patients with Takayasu's arteritis showed a significantly decreased blastogenic response to the mitogen concanavalin-A when cultured in the presence of endothelial cells. Our result thus suggests that endothelial cells may probably induce an inhibitory effect on the lymphocytes in patients with Takayasu's arteritis.

Potency assay of diphtheria antitoxin in vero cell micro-cultures

Se establecieron condiciones para llevar a cabo la titulación de antitoxina diftérica en células Vero (TCC), y comparar los resultados con la prueba intradérmica (TID) tradicionalmente empleada en todo el mundo para determinación de potencia de toxoide diftérico y de antitoxina de uso terapéutico. Los resultados de titulaciones en pruebas intradérmicas y en cultivos celulares mostraron gran repetibilidad y detectabilidad a concentraciones muy bajas de toxina en la prueba de cultivos celulares, así como una correlación satisfactoria en la titulación de antitoxinas preparadas por inmunización con Patrón Internacional de OMS y con antitoxina de uso terapéutico, pero en los sueros de cobayo se observó un título aproximadamente 10 veces menor al de la prueba intradérmica. Se discuten las posibles causas de estas diferencias de títulos. Esta prueba se podrá adoptar en la forma propuesta para determinar potencia de antitoxina diftérica. En la prueba de potencia del toxoide diftérico, se podría usar si el límite de título en los cobayos se ajusta a 0.2 UIAD en lugar de 2.0 UIAD/ml que se emplea actualmente, considerando la equivalencia obtenida entre las dos pruebas y tomando en cuenta una relación 1:10 entre las pruebas TCC y TID

Actividad fagocítica de monocitos de sangre venosa de pacientes con tuberculosis pulmonar / Phagocytic activity of venous blood monocytes from patients with pulmonary tuberculosis

El papel que desempeña el macrófago en los individuos infectados con Mycobacterium tuberculosis es fundamental al inicio y durante el curso de la infección. En este trabajo, presentamos la actividad fagocítica in vitro de monocitos de sangre venosa aislados de pacientes tuberculosos. El parámetro estudiado fue la capacidad de los macrófagos para fogocitar eritrocitos de carnero en ensayos in vitro el cual se expresa como índice fagocítico(IF). Los resultados muestran que el IF se encuentra disminuido en los macrófagos de pacientes con tuberculosis PPD- y, en forma más evidente, en los pacientes PPD+ con respecto al IF mostrado por los macrófagos de individuos sanos. Estos resultados sugieren que la disfunción de la fagocitosis en los macrófagos de pacientes con tuberculosis contribuye a la cronicidad de la infección

Proteins of Entamoeba histolytica trophozoites involved in the adhesion to target cells

To identify the molecules involved in the adhesion of Entamoeba histolytica trophozoites to target cell we used monoclonal antibodies (MAbs) and adhesion-deficient mutants. Human red blood cell (RBcs) were also used as especific carriers to identify the ameba molecules with affinity to the target cell receptors. MAbs adh-1 and Adh-2 inhibited adhesion of RBCs to the trophozoites and recognized a 112-kDa surface protein that was present in the wild type strain, but was absent or modified in adhesion-deficient mutants. In other experiments, live trophozoites were incubated with fixed-RBCs and after lysis of the trophozoites, proteins attached to the RBCs surface were separated by PAGE, electrotransferred to nitrocellulose membranes and detected by polyclonal antibodies. The 112 kDa protein was found attached to the RBCs. Other molecules identified as proteins involved in the target cell-parasite contact were the 210, 160, 90, 70, 50 and 24 kDa proteins. The 112, 90 and 24kDa polypeptides were functionally altered in adhesion-deficient mutants

Proliferación de leucocitos de sangre periférica en presencia de sueros de pacientes con cáncer cervicouterino e interleucina-2 recombinante / Proliferation of peripheral blood lymphocytes in presence of sera from patients with cervical cancer and interleukin-2

Diversos estudios han centrado su atención en el establecimiento de una técnica que permita activar y hacer responder de forma específica a linfocitos del paciente contra su propio tumor. Esto se ha conseguido en ocasiones activando linfocitos con mitógenos endógenos, como la interleucina-2 (IL-2). Sin embargo, se ha encontrado que algunos tumores secretan al torrente sanguíneo factores inhibidores de este tipo de respuesta inmune. Con la finalidad de determinar si las células de cáncer de cérvix (CaCu) secretan al torrente sanguíneo factores inhibidores de la respuesta proliferadora de linfocitos, en este trabajo se utilizaron sueros de 12 pacientes con CaCu en cultivos de leucocitos de sangre periférica (LSP). Para evaluar la posible inhibición de estos sueros en la activación mediada por la IL-2, se utilizaron tanto LSP de pacientes con CaCu como de donadores normales. Los resultados obtenidos muestran que in vitro no existe inhibición de la activación a la proliferación de LSP provenientes de pacientes con CaCu por la rIL-2, tanto en presencia de sueros normales como de pacientes con CaCu. En consecuencia, estos resultados indican que las células malignas que constituyen al CaCu probablemente no secretan factores inhibidores de la activación linfocitaria y que los LSP de estos pacientes no han perdido la capacidad de ser activados por la IL-2.